基因表达定量检测 通过PCR扩增曲线可以判断基因表达量吗

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一、npct检测是什么

1、NPCT检测，即非线性相位相关传输检测技术，是一种用于检测光学信号传输特性的技术。它通过利用光信号在传输过程中的非线性效应，对信号的相位信息进行相关传输检测，从而实现对光学信号的传输特性进行表征。

2、具体来说，NPCT检测技术利用了光的二次谐波产生过程，即当强光通过介质时，会产生频率为原来光波频率两倍的谐波。这个过程与光的相位有关，因此，通过测量谐波的强度和相位，可以得到光学信号的相位信息。

3、NPCT检测技术具有高灵敏度、高分辨率和高精度等优点，因此在光学通信、光学传感等领域得到广泛应用。它可以用于检测光纤中的微小变化，如光纤微弯、微小折射率变化等，这些变化可能会对光学信号的传输产生重大影响。因此，NPCT检测技术对于保障光学通信和传感系统的稳定性和可靠性具有重要意义。

二、在荧光定量分析中

我们实验室用的是SYBR染料法，用qRTPCR来比较不同处理组间目的基因的表达差异。 实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 荧光定量PCR原理 荧光定量PCR最早称TaqManPCR，后来也叫Real-TimePCR。原理：随着PCR反应的进行，PCR反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一个荧光强度信号，这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线图。 荧光定量检测根据所使用的标记物不同可分为荧光探针和荧光染料。荧光探针又包括Beacon技术（分子信标技术，以美国人Tagyi为代表）、TaqMan探针（以美国ABI公司为代表）和FRET技术（以罗氏公司为代表）等；荧光染料包括饱和荧光染料和非饱和荧光染料，非饱和荧光染料的典型代表就是现在最常用的SYBRGreenⅠ；饱和荧光染料有EvaGreen、LCGreen等。 嵌合荧光染料法（SYBRGreenⅠ） SYBRGreenI是荧光定量PCR最常用的DNA结合染料，与双链DNA非特异性结合。在游离状态下，SYBRGreenI发出微弱的荧光，但一旦与双链DNA结合，其荧光增加1000倍。所以，一个反应发出的全部荧光信号与出线的双链DNA量呈比列，且会随扩增产物的增加而增加。SYBRGreenI荧光染料与DNA双链的结合 双链DNA结合染料的优点：实验设计简单，仅需要2个引物，不需要设计探针，无需设计多个探针即可以快速检验多个基因，且能够进行熔点曲线分析，检验扩增反应的特异性，低的初始成本，通用性好，因此国内外在科研中使用比较普遍。 荧光探针法（Taqman技术）：PCR扩增时，加入一对引物的同时再加入一个特异性的荧光探针。该探针为一直线型的寡核苷酸，两端分别标记一个荧光报告基团和一个荧光淬灭基团，探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收，PCR仪检测不到荧光信号；PCR扩增时（在延伸阶段），Taq酶的5'－3'切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步，这也是定量的基础所在。 荧光定量PCR的应用 1核酸定量分析。对传染性疾病进行定量定性分析，病原微生物或病毒含量的检测,比如近期流行的甲型H1N1流感，转基因动植物基因拷贝数的检测，RNAi基因失活率的检测等。 2基因表达差异分析。比较经过不同处理样本之间特定基因的表达差异(如药物处理、物理处理、化学处理等)，特定基因在不同时相的表达差异以及cDNA芯片或差显结果的确证。 3SNP检测。检测单核苷酸多态性对于研究个体对不同疾病的易感性或者个体对特定药物的不同反应有着重要的意义，因分子信标结构的巧妙性，一旦SNP的序列信息是已知的，采用这种技术进行高通量的SNP检测将会变得简单而准确。 4甲基化检测。甲基化同人类的许多疾病有关，特别是癌症，Laird报道了一种称作Methylight的技术，在扩增之前先处理DNA，使得未甲基化的胞嘧啶变成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不受影响，用特异性的引物和Taqman探针来区分甲基化和非甲基化的DNA，这种方法不仅方便而且灵敏度更高。 5产前诊断：人们对遗传性物质改变引起的遗传性疾病还无法治疗，到目前为止，还只能只能通过产前监测，减少病婴出生，以防止各类遗传性疾病的发生，如为减少X连锁遗传病患儿的出生，从孕妇的外周血中分离胎儿DNA，用实时荧光定量PCR检测其Y性别决定区基因是一种无创伤性的方法，易为孕妇所接受。 6病原体检测：采用荧光定量PCR检测技术可以对淋球菌、沙眼衣原体、解脲支原体、人类乳头瘤病毒、单纯疱疹病毒、人类免疫缺陷病毒、肝炎病毒、流感病毒、结核分枝杆菌、EB病毒和巨细胞病毒等病原体进行定量测定。与传统的检测方法相比具有灵敏度高、取样少、快速简便等优点。 7药物疗效考核：对乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)定量分析显示：病毒量与某些药物的疗效关系。HCV高水平表达，干扰素治疗作用不敏感，而HCV低滴度，干扰素作用敏感；在拉米夫定治疗过程中，HBV-DNA的血清含量曾有下降，随后若再度上升或超出以前水平，则提示病毒发生变异。 8肿瘤基因检测：尽管肿瘤发病的机理尚未清楚，但相关基因发生突变是致癌性转变的根本原因已被广泛接受。癌基因的表达增加和突变，在许多肿瘤早期就可以出现。实时荧光定量PCR不但能有效地检测到基因的突变，而且可以准确检测癌基因的表达量。目前用此方法进行过端粒酶hTERT基因、慢性粒细胞性白血病WT1基因、肿瘤ER基因、前列腺癌PSM基因、肿瘤相关的病毒基因等多种基因的表达检测。

三、通过PCR扩增曲线可以判断基因表达量吗

普通PCR一般只能定性判断基因表达量，但是现在有一种新技术叫做：实时荧光定量PCR这种技术使得通过PCR扩增来定量计算RNA含量成为可能，并且精确度较高。所以，传统曲线只能定性判断，实时荧光定量PCR曲线可以定性判断。

四、荧光定量pcr模板是

1、在实时荧光PCR中。模板的定量有2种方法：绝对定量和相对定量。

2、绝对定量一般通过已知的标准曲线来确定我们所感兴趣基因的拷贝数；相对定量指在一定样品中靶序列相对于另一参照序列的量的变化.如果你做的是DNA的定量，可以用DNA模板。

3、你用质粒作为标准品做标准曲线，最后可以换算出来拷贝数，这是绝对定量。

4、如果是做转录，表达量的变化，需要提取RNA，反转录为cDNA，然后再做相对定量。

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