目的基因的检测和鉴定,怎样迅速的获得大量目的基因
本篇文章给大家谈谈目的基因的检测和鉴定,以及怎样迅速的获得大量目的基因对应的知识点,文章可能有点长,但是希望大家可以阅读完,增长自己的知识,最重要的是希望对各位有所帮助,可以解决了您的问题,不要忘了收藏本站喔。
一、等长的目的基因是怎么得到的PCR基因扩增
1、PCR技术是DNA扩增技术,它能在比较短的时间内产生大量的DNA。在获取目的基因后才使用PCR技术。
2、用限制性内切酶将总DNA切成小片段,连到质粒或噬菌体载体上,把这些质粒转化到细菌,随着细菌繁殖而复制,这个过程又称为基因克隆(geneclone)
3、将总DNA包含的基因组各片段分别克隆在质粒或噬菌体载体上,便构成了该生物的基因文库(genelibrary)。
4、细胞核中转录的mRNA,已经加工去除内含子,只有外显子(编码蛋白质的序列),比构建基因文库优越,因此,先从细胞中提取所需的mRNA。
5、以mRNA为模板,在逆转录酶的作用下,合成互补的DNA片段(complementaryDNA,cDNA),在逆转录完成时,mRNA被降解。在大肠杆菌DNA聚合酶I的Klenow片段的作用下,再以第一条DNA为模板,合成另一条互补DNA链。
6、优点在细胞分化各阶段细胞往往转录出特异的编码特殊蛋白质的mRNA。因此,用cDNA方法获取的DNA片段往往是具有特定功能的目的基因。
二、怎样迅速的获得大量目的基因
1.从基因文库中获取目的基因(俗称:鸟枪法):将含有某种生物的许多DNA片段,导入受体菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物不同的基因,称为基因文库。当需要某一片段时,根据目的基因的有关信息,如根据基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色体上的位置、基因的转录产物mRNA,以及基因的表达产物蛋白质等特性来获取目的基因。
2.化学合成法。已知目的基因的核苷酸序列,可用DNA合成仪直接合成。
3.用PCR技术扩增技术提取。已知目的基因引物的序列,将整个DNA放入合成仪,因为只有当引物与模板结合后DNA热聚合酶才能行使聚合功能,所以只有引物中间的目的基因被大量扩增,即被提取出来。参考资料:人教版生物选修三
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